Mitsuda positivo en enfermos de lepra lepromatosa: estudio de este viraje (1ª parte)

La enfermedad de Hansen tiene la característica de ser en su clasificación catologale por la prueba complementaria de la intredermorreación de Mitsuda. Siendo ésta normalmente positiva en enfermos de lepra tuberculoide, y negativa en enfermos de lepra lepromatosa; lo cual hasta ahora se considera a su vez vía de clasificación inmunológica. El hallazgo en enfermos de lepra lepromatosa un test de Mitsuda positivo, nos llevaría a considerar un posible cambio inmunológico en estos enfermos. Para estudiar este viraje, realizamos los seguientes pasos: Corroborar histológicamente la positividad de la intradermorreación de Mitsuda en estos enfermos de lepra lepromatosa con diferentes tinciones (H.E., Fite) y marcadores inmunohistoquímicos (S-100, CD-68, MAC-387, HLA-DR, Muramidasa, Factor XIIIa). Estudiar la situación inmunológica de los mismos (Proteinograma, Inmunoglobulinas, Linfocinas, Gamma-Interferon) y, finalmente, valorar este viraje buscando el/los motivos que hayan podido dar lugar a este cambio, confirmando una situación inmunológica compatible con la normalidad. Se comprueba en este estudio que el viraje (de negativo a positovo) del test de Mitsuda no es infrecuente, constituyendo el 27'4% de la poblacion testada con lepra lepromatosa. Los enfermos se caracterizaban por ser bacteriológicamente negativos en más de 15 años. Todos ellos fueron tratados con multiterapia. La inmunidade humoral se encontraba ligeramente alterada en los valores de la inmunoglobulina G, así como en los subtipos IgG, IgG2 e IgG3, debido a las lesiones hepáticas y/o renales que estos enfermos conllevan. La inmunidad celular se encontró normal; el resto de parámetros estudiados, también se encontraron normales, no reflejando pues signos de actividad con respecto a la enfermedad de Hansen, y considerando a estos sujetos con na situación inmunológica normal. Dada la gran variedad de respuesta, a todos estos test, incluso en una población sana como resultado de una hetereogeneidad genética, nos hacen interpretar que los pacientes lepromatosos que positivizaron el test de Mitsuda, deben pertenecer al grupo de lepra subpolar, ya que los tipos polares muestran estabilidad inmunológica sein modificación de sus mecanismos de inmunidad celular e hipersensibilidad retardada a pesar del tratamiento.

Studies on lepromin and soluble antigens of M.leprae: their classification standardization and use.

Before the discovery of armadillo as a susceptible animal the source of M.leprae was limited and hence the use of lepromin was not common in the field. In recent times, the soluble antigens of armadillo-derived M.leprae have been used extensively in the field. Although the results of the study show that these antigens do not differentiate always a susceptible form from the resistant form, they are able to segregate the polar forms of leprosy. In a given field situation the criteria for diagnosis is so stressed that leprosy is overdiagnosed and within one year of follow up nearly half the number of cases are noted as not leprosy. Hence, in such situations lepromin reaction would be definitely a poor correlate with the type of leprosy. However, in hospital based studies the lepromin reaction has always been and would remain useful in confirming the classification (Sengupta et al 1984). Lepromins and M.leprae soluble antigens have gone through extensive standardization procedures. As these antigens contain mostly common mycobacterial antigens along with the M.leprae-specific antigens, these antigens are unable to specifically diagnose M.leprae infection. After purification of M.leprae from infected armadillo tissue, it was expected that the soluble antigen of M.leprae would probably be as useful as tuberculin. However, this was not found to be true in case of lepromin. Specificity for M.leprae has been noted in the epitopes (antigenic sites) on cross reacting molecules (12 kd, 18 kd, 28 kd, 35 kd, 36 kd) of mycobacteria (Ivanyi et al 1983; Watson 1989). These specific epitopes, if synthesized, could be of use as skin test antigens for determining M.leprae infection.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

A reaçao de Mitsuda seriada na identificaçao das formas reacionais tuberculóide e dimorfa da hanseníase / ?

Estudou-se a reaçao de Mitsuda em 37 pacientes portadores de hanseníase, sendo 18 da forma tuberculóide reacional e 19 da forma dimorfa reacional, sob o ponto de vista clínico, histológico e baciloscópico, com leituras realizadas aos 30, 60, 90, e 120 dias, com o objetivo de se tentar identificar uma forma da outra. A maioria dos pacientes tuberculóides reacionais apresentou reaçao de Mitsuda positiva +. As reaçoes de Mitsuda diminuíram com o tempo nos dois grupos, sendo mais persistentes no grupo tuberculóide reacional. A baciloscopia aos 30 dias foi negativa ou houve presença de raros bacilos em 77,78 por cento dos casos tuberculóides reacionais. Conclui-se que os tuberculóides reacionais possuem uma maior capacidade de clareamento bacilar que os dimorfos reacionais e que a reaçao de Mitsuda pode ser útil na identificaçao dessas duas formas e, inclusive, sugerir sua evoluçao quanto ao diagnóstico e quanto à terapêutica

Estado inmunológico de los hansenianos de la provincia de Santa Cruz de Tenerife

Se realiza un estudio de la situación inmunológica de la endemia hanseniana en la provincia de Santa Cruz de Tenerife, por medio de la reacción de Mitsuda practicada con una lepromina H de fabricación propia, que se probó al 44 por ciento del censo actual de enfermos. Los resultados fueron concordantes con los restantes criterios de clasificación que se utilizaron en el momento de su Censo Oficial. Asimismo se extraen distintas consideraciones, sobre las características de la endemia, que se podrían hacer extensivas a todo el Archipiélago Canario.

IV. El teste de Mitsuda con lepromina de armadillo de sujetos sanos vacunados y no con la vacuna antituberculosa BCG (+)

El número y la intensidad de reacciones positivas al test lepromínico con el uso de la lepromina A aumentan en las personas vacunadas con el BCG en comparación con los no vacunados. Estos resultados sa basan en el estudio de un total de 3.096 individuos de los cuales 1.399 vacunados con el BCG. Los datos de base son los siguientes: Mitsuda negativos: vacunados con BCG 6,43 por ciento. No vacunados, 37,37 por ciento. Mitsuda positivos con nódulo ulcerado: vacunados con BCG 45,46 por ciento. No vacunados, 11,66 por ciento. Los AA. son de la opinión que la aumentada intensidad de la reacción, causada por el BCG, es de tipo ICM específica. No se puede olvidar que el Micobacterium leprae y el Mycobacterium tuberculosis tienen algunos antígenos en común, por lo tanto, en lugar de deshechar el empleo del BCG como medio de lucha contra le lepra, sería de interés de estudios como se pueda integrar su falta de antigenos específicos frente al M. leprae.

V.- La vacuna BCG y la lepromina de armadillo suministrada contemporaneamente sea en asociación sea separadamente (+)

42 niños de edad comprendida entre 6 y 14 años hans sido sometidos contemporáneamente al test de la lepromina A y la vacunación co BCG. La lectura fue practicada al 30.º día. Los 16 niños que recibieron los dos antígenos conjuntamente en una sola inyección tuvieron todos alo 30.º día una intensa prositividad con nódulos ulcerados. (Un segundo test con sólo lepromina A y estudio de respuesta de los linfocitos T frente al antígeno lepromínico nos dirán cuando el BCG haya influenciado al antígeno inmunizante de la lepromina A en sentido específico).En los niños que recibieron los dos antígenos separadamente se observa que el BCG determina en todos ellos un nódulo ulcerado, mientras que la lepromina A fue negativa en 5 casos y positiva en los restantes 21 casos, dando la ulceración del nódulo en 4 casos. Se hacen consideraciones sobre la influencia qu el BCG puede haber tenido en la respuesta lepromínica y programas para ulteriores estudios.

VII.- Sobre inoculación de lepromina A/BCG en sujetos negativos a tres test leprominicos secesivos

Tres jóvenes mujeres no enfermas de lepra, ni de tuberculosis resultaron negativas al lepromin-test tres veces seguidas. Dos de ellas fueron sometidas a la vacunación de la mezcla de lepromina A/BCG y resultaron a otro test lepromínico fuertemente positiva (nódulo de 12 mm. y ulceradas), la tercera la del control, quiere decir no sometida a la vacunación con el BCG, dio a este cuarto test una respuesta dudosa (nódulo de 4 mm. que desaparició sin dejar cicatriz). Los autores se proponen de repetir otras veces el test de Mitsuda para esclarecer la duración de su positividad, y de ampliar el estudio con una casuística más numerosa, considerando que hasta ahora la mezcla A/BCG (49 casos), y el BCG separado, pero contemporáneo a la lepromina A (55 casos), no han inducido efectos colaterales indeseables, ni más de los que produce el BCG a solas.

I.- Resultados del promin test utilizando lepromina humana (H) y lepromina de armadillo (A) (+)

Los AA. han comparado la intensidad de la acción de la lepromina de armadillo (A) y humana (H), en enfermos de lepra (núm. 35), convivientes (núm. 14; personas sanas: adultas (núm. 50) y niños (núm. 102); personas con tuberculosis: adultas (n´m. 64) y niños (núm. 16). Sobre las 281 personas estudiadas se han obtenido los siguientes datos: las leprominas A y H han dado respuestas concordantes en el 96,49 por ciento de las cuales la concordancia: en el signo negativo (-) o positivo (+) y en el valor (1 + 2, 3 +) fue del 82,91 por ciento y sólo en el signo del 13,87 por ciento y han discordado, en cambio, aún en el signo el 3,28 por ciento. Los AA. concluyen que la lepromina A puede sustituir la lepromina H en cualquier grupo de personas y que sería de gran utilidad por el gran empleo que puede hacerse tanto para el screning de la población Mitsuda-negativa en zonas de endemia hanseniana, cuanto para los estudios inmunoprofiláticos en espera de una vacuna a base de M. leprae obtenidos por cultivo de laboratório.

Modificaciones clínicas e histológicas de la reacción de Mitsuda en enfermos de lepra lepromatosa inactivada

Se ha realizado el test de Mitsuda en 46 enfermos lepromatosos polares con más de un año de inactividad clínica e bacteriolóca. Se ha observado, en 3 casos, positividad clínica, confirmada histológicamente con imágenes de granulomas tuberculoides. Los tres casos pertenecen al grupo de enfermos con más de 11 años de incatividad, con gran afectación de su sistema nervioso periférico y aun bajo régimen terapéutico. Salvo contadas excepciones, concluimos, la leprominorreacción persiste negativa toda la vida en los enfermos L.L.

Lepromin vs purified bacillus suspension. I. Preparation of a purified bacillus suspension (with a note on nile-blue staining of smears)

The various methods that have been employed for obtaining tissue-free suspensions of leprosy bacilli are reviewed briefly. Most of them were eliminated from consideration for practical purposes, because they deo not meet the primary requirements of simplicity of technique or - and especially - of economy of the leproma material. After experimentation it was found most practical to harvest the bacilli from the pulped leproma tissue with chloroform, as in the first step of preparing Dharmendra's antigen, and then to dilute the pooled chloroform extract with two times its volume of acetone, after which the bacillary bodies are deposited by centrifuging and resuspended in phenol-saline. The bacilli so obtained are affected to some degree by the chloroform, being distinctly paler in color and of thinner appearance after Ziehl-Neelsen staining than those in the standard lepromin made from an aliquot of the same starting material. Consequently, the final suspension was made up with approximately 50 per cent morer bacilli than the lepromin made for use as the control in clinical tests.

Lepromin vs purified bacillus suspension. II. Comparative tests with a purified bacillus suspension

Comparative tests of Wade's "purified acillus suspension" and the standard lepromin prepared from the same pool of leproma have been made in the Philippiones, Netherlands New Guinea, East Africa and South Africa. Consistently in the comparisons the standard lepromin gave more positive Mitsuda reactions, or more strong reactions, than the suspension; and in the healthy children tested the PBS sometimes gave negative results when the reactions to lepromin were positive. For this reason alone it would not be satisfactory for use in field work in which children are involved. Lepromin gave more early reactions than the suspension in the cases for which that effect was reported (Philippines), suggesting that in the preparation of the latter the immediately-available antigenic elements had partly been eliminated. The suspension on the whole caused somewhat less ulceration of the reaction lesions, which is a point in its favor. However, contrary findings were not infrequent, so use of the product could not be advocated strongly on that ground. The results in tuberculoid cases permit comparison of the reactivities of the four different regional groups, whether considering average sizes of the reaction lesions or the percentage of the stronger reactions. Despite the high percentages of positive reactors in the Philippine subjects, the New Guinea people proved to be distinctly more so, and the East African cases the most reactive of all. The South African cases were much less reactive in comparison. The question of why people living in different environments differ materially in reactivity remains an intriguing problem.

The influence of repeated lepromin testing on the Mitsuda reaction in healthy people

Inyecciones repetidas de lepromina pueden ocasionar positivización de la reacción de Mitsuda o intensificación de la misma en reactores débilmente positivos. Resulta por lo tanto indispensable tener un grupo testigo en los experimentos con BCG u otras vacunas administradas a fin de acrecentar la resistencia. No hay todavía suficientes datos para demonstrar que las inyecciones repetidas de lepromina acrecienten la resistencia contra la lepra.

Enumeration of Mycobacterium leprae for the standardization of lepromin

1- Optimal conditions for declumping and dispersing mycobacteria in turbid suspensions and tissue homogenates for microscopic purposes have been defined. 2- Shaking 10 per cent leproma suspensions, or ordinary lepromins with tissue in 3-5 per cent concentrations, for 3 minutes with 10 per cent chloroform by volume releases M. leprae from clumps and globi. Further dilution to 1 per cent tissue, with shaking in the presence of 1 per cent serum, permits the preparation of stained films containing suitable numbers of uniformly distributed bacilli. Methods for microscopic enumeration and for comparing the concentrations of bacillui have been given. 3- It has again been shown that the numbers of M. leprae in lepromas may vary over a 10-fold range. 4- Even with simple methods for counting and adjusting the bacterial content of lepromin, the pooling of lepromas must be continued in order to obtain reasonable uniformity in the quality of the bacilli and the concentration of autoclaved human tissue components.